CULTIVO DE BACTERIAS

Maestra: Janet Pineda Rincon

Integrantes del Equipo:

Mauro Alberto Martell Vargas

Marisa M. Sandoval Perez

Paola Lilian Esquivel Blanco

Mercedes Estefania Carrillo Escoto

Lizette Mendez Moreno

Materia: Identificar Microorganismos a traves de Analisis Microbiologicos

Fecha de Entrega: 31/Oct/08

Grado y Grupo: 3n Laboratorista Quimico

Cbtis 19 Colima

Introducción

RECOLECCION DE MUESTRAS

La correcta recolección de una muestra para su cultivo es posiblemente la etapa mas importante en el aislamiento de microorganismos responsables de enfermedades infecciosas, una muestra deficientemente recogida puede ser el fracaso de asilar el microorganismo causante y la recuperación de contaminantes puede conducir a una terapia incorrecta o perjudicad por ejemplo; supongamos que se a aislado KLEBSIELLA PNEUMONIAE de esputo de un paciente con neumonía clínica, si el esputo a sido incorrectamente recogido y consiste en realidad de saliva, la KLEBSIELLA PNEUMONIAE puede representar que en ambiente comensal de zonas nasales, orificios nasales, o faringe posterior, y puede no reflejar la verdadera causa de la neumonía.

La muestra para cultivo debe ser material del verdadero sitio de infección y debe recoger con mínimo de contaminación de tejidos, órganos o secreciones adyacentes.

1.- INCULO PRIMARIO.

Se puede efectuar con un hisopo con otros dispositivos, una ve z hecho el inculo y se disemina la muestra para ello se emplea un alambre recto o asa, diseminar en los 4 cuadrantes de la caja.

El inculo se disemina sucesivamente en estrías con un movimiento de arriba y abajo en cada cuadrante dando vuelta a la placa en ángulos de 90° el alambre debe esterilizarse en las sucesivas estrías.

El propósito de esta técnica es diluir el inoculo suficientemente sobre la superficie del agar, como para poder obtener colonias bacterianas bien aisladas a partir de unidades formadas de colonias ( UFC).

Las colonias aisladas se pueden luego subcultivar individualmente transfiriéndolas a otros medios estudiados en medios diferenciales.

La técnica de estrías empieza para inocular medios de agar para el recuento semicuantitativo se efectúa:

Se utilizan asas de platino caliente para inocular 0.01 o 0.001 mililitros de liquido se sumergen en una muestra de orina no centrifugada y se aplican en una sola estría que cruce el centro de la placa de agar.

El inoculo se disemina uniformemente en Angulo recto a la estría principal luego la placa se voltea en Angulo de 90° y se disemina en inoculo hasta cubrir toda la superficie del agar.

Substancias :

Agua destilada

Agar Mac Konkey

Agar Manitol

Agar Sangre

Fenol

Agua

Material:

Mecheros 3

Matraz Aforado

Algodón

3Vidiros de Reloj

1 Espátula

Papel para esterilizar

Probeta Graduada

Autoclave Jabón

Hisopos

Incubadora

Medidor de ph

PROCEDIMIENTO

Pesamos cada vidrio de reloj, utilizamos la regla de 3 con el fin de saber cuanto agar vamos a necesitar, después añadimos los 3 tipos de agar ( Sangre, Manitol, Mac Konkey), luego lavamos bien los 3 matrazases y los calentamos sobre el mechero para secarlos, después etiquetamos el matraz con el nombre del agar que corresponde a cada uno,
Con una probeta graduada medimos la cantidad de agua destilada que vamos a usar, y vertemos el agua que vamos a utilizar, depuse lo llevamos al fuego para desbaratar los grumos.

Luego se mide el ph con un indicador que sea el indicado.

Para hacer los tapones necesitamos algodón, un trozo de gasa colocamos 2 hileras de 5 bolitas de algodón y los cubrimos con la gasa y un poco de cinta testigo
Para desbaratar los grumos de las agares colocamos los tapones y los forramos con el papel y un trozo de cinta

Después envolvimos las cajas petri previamente lavadas y secadas, las forramos con papel para esterilizar y utilizamos cinta testigo.

Después los metimos al Autoclave y los empezamos a esterilizar con calor húmedo a 15 libras de presión de vapor por 15 minutos,

Ya pasados los 15 minutos retiramos los materiales del autoclave, y desinfectamos la mesa de trabajo, primero la lavamos rigurosamente con agua enjabonada, retiramos el exceso y la cubrimos de Fenol, ya terminado el proceso de desinfección de la mesa, conectamos los mecheros. Una vez terminado esto, acomodamos los materiales.

Para preparar el agar sangre, necesitamos que un miembro del equipo donara sangre, una vez que le sacamos la sangre, llevamos la temperatura del matraz con al agar al la temperatura corporal que es de 37° A 35° ,esto con el fin de que no se coagule la sangre dentro del matraz, ya finalizado este procesábamos a la mesa de trabajo y permanecemos callados todo con el fin de evitar que microorganismos extraños en los agares, empezamos a verter los agares en las cajas petri con los mecheros bien encendidos, ya que vertamos al agar pasamos el mechero sobre las cajas para eliminar las burbujas que se hayan formado.

Después esperamos a que el agar se solidifique para empezar a cultivar,
La muestra la tomamos de la garganta de un compañero con in hisopo ya estéril, después procedimos a colocar un poco de bacterias en una orillita de la caja primero el mac koncay, manitol y el sangre lo dejamos al ultimo porque la mayoría de bacterias quedarían hay, después en el mechero ponemos el Haza para que se esterilice (que se ponga al rojo vivo) y luego enfriamos el asa en un ladito entre la caja y el agar y tenemos que recordar en donde colocamos la muestra de la garganta arrastramos con el asa en forma de estrías hasta la mitad, llevamos el asa nuevamente al fuego y nuevamente arrastramos bacterias nuevamente asiendo estrías y así sucesiva mente en los cuatro cuadrantes en las tres cajas.

Luego los tapamos, etiquetamos y metemos ala incubadora, y lo revisamos cada 24, 48 o 72 horas si creció alguna bacteria luego se hace l reporte de lo que observamos

*AGAR SANGRE:
En este agar a las 24 horas se presentaron cambios mínimos, se formaron pequeñas colonias de staphilococos que son los círculos grandes, y muchas colonias de staphilococos que son los círculos mas pequeños.
A las 72 horas la cantidad de streptococos aumento poco.

AGAR MANITOL
A las 24 horas hubo solo 2 colonias de Staphilococos Aureos.
A las 72 horas la cantidad se triplico y se formo una nueva colonia de Staphilococos Epidermis.

AGAR MAC KONKEY
No hubo ningun cabio en el, ni a las 24 horas, ni alas 72 horas, debido a que solo crecen bacterias gram

TINCION GRAM:

Tomamos el asa la esterilizamos calentándola al rojo vivo, la dejamos enfriar y tomamos la muestra de bacterias de las cajas y la colocamos en un porta objetos y luego sellamos la muestra al porta objetos, se le agrega una gota de azul de metileno, una vez aplicado el azul, esperamos 1 minuto y enjuagamos gota a gota, después lo dejamos secar, una vez seco añadimos un poco de mordiente que vendría siendo el yodo lugol, enjuagamos de nuevo gota a gota y dejamos secar nuevamente, luego aplicamos unas gotas de safranina, y la dejamos secar por 1 minuto, luego enjuagamos como se indico y dejamos secar nuevamente, y después nos fuimos a observar en el microscopio

Esto fue lo que observamos

EN EL SANGRE

Observamos los
*staphilococos: su morfología de colonia es: su tamaño es mm, su elevación es umbilicada, su color esta entre blanco y amarillo su superficie es mate.
*diplococos: su morfología colonial es: tamaño mm, su forma es circular, su elevación es convecsa, su margen es entero, su color esta entre negro y blanco, su superficie es brillante.
*cocos: su morfología de colonia es: tamaño es mm, su forma es puntiforme, su elevación es plano, su color es negro, su superficie es mate.
El staphilococos esta en grandes colonias y diplococos al igual que el cocos estan en pequeñas colonias.